Проф. Джо Камминс (Канада)

Джо Камминс

Вирусы и вирусные нуклеиновые кислоты контаминируют множество вакцин


ISIS Report 13/12/2010

Перевод Рафаэля Набеева (Екатеринбург)
Камминс Джо — почетный профессор генетики Университета Западного Онтарио, консультант Института науки в обществе (ISIS).

Оригинал по адресу
http://www.i-sis.org.uk/Viruses_and_Virus_Nucleic_Acid_Contaminate_Vaccines.php

Посторонние вирусы и ДНК в вакцинах

В настоящее время в производстве вакцин используются субстраты из клеток оплодотворенных куриных яиц, субстраты из клеточных культур, а также комбинированные субстраты. "Ослабленные" вакцины создаются из патогенов путем снижения их вирулентности, но с сохранением их жизнеспособности, в противоположность вакцинам из "убитых" (инактивированных) вирусов. Инактивация производится путем выбора непатогенных штаммов микроорганизмов после воздействия высоких и низких температур или целевого уничтожения генов вирусов.

Много живых аттенуированных вакцин производится на клеточных линиях. Некоторое такие вакцины содержат не только ослабленный штамм конкретного патогена, но также и посторонние вирусы и вирусные нуклеиновые кислоты1. Эти контаминанты являются мусором, и люди, назначающие вакцины, должны предупреждать пациентов о с ними связанных потенциальных опасностях. Недавно Управление контроля пищевых продуктов и лекарств Соединенных Штатов (FDA) признало контаминацию живой ротавирусной вакцины (вакцины для защиты от диареи путешественников) и приостановило ее использование, но позже решило, что польза перевешивает потенциальный риск контаминации2. Это решение Управления является преждевременным, поскольку цирковирус, контаминирующий ротавирусную вакцину, способен активно размножать, копировать и преобразовывать вирусные гены и вырабатывать токсичные продукты. Случаи контаминации вакцин не исключение, а широко распространенное явление.

Уроки контаминации вакцин вирусом SV40

Человеческая популяция была непредумышленно инфицирована обезьяним вирусом SV40 через вакцины, выращивавшиеся на зараженных им клетках. Молекулярно-биологические и эпидемиологические исследования показывают, что SV40 мог передаваться от человека человеку как горизонтальная инфекция, независимо от получения раннее вакцин, зараженных SV40. Было установлено, что у людей вирус SV40 был связан со специфическими разновидностями опухолей, таких как опухоли мозга и костей, мезотелиомы и лимфомы, а также с заболеваниями почек3. SV40 был обнаружен как контаминант полиовакцины, которой были привиты миллионы граждан США в период между 1955 и 1963 гг., и партии которой позднее разошлись по всему миру. После того, как SV40 был исследован на предмет запуска трансформаций человеческих клеток в культурах и опухолей у животных, исследователи начали искать этот вирус в опухолях человека4. Например, в 2005 году исследования в Коста-Рике обнаружили, что SV40 статистически значимо связан с раками иммунной системы человека5. Управление контроля пищевых продуктов и лекарств Соединенных Штатов признало наличие SV40 в ранних полиовакцинах и связанный с этим риск:

Контаминация полиовакцин и аденовирусных вакцин в начале 1960-х годов и постоянно возникающие вопросы касательно того, может ли SV40 быть ответственным за некоторые неоплазмы (рак) у человека, подчеркивают важность отсутствия в вакцинах посторонних агентов (см. также "Гриппозные вакцины и риск рака"7).

Контаминация полиовакцин вирусом SV40 это старый урок, ныне игнорируемый в погоне за прибылью от производства вакцин.

Многочисленные человеческие вакцины контаминированы

Существует множество документально зафиксированных случаев контаминации вакцин, предназначенных для человека7. Коревая вакцина Attenuvax, выращиваемая на клеточных культурах из соединительной ткани куриных эмбрионов, была контаминирована вирусом птичьего лейкоза (раковым вирусом миелоидного лейкоза) и птичьим эндогенным ретровирусом. Вакцина от желтой лихорадки YFvax, выращиваемая на той же клеточной культуре, была контаминирована птичьим эндогенным ретровирусом. Вакцина от герпеса типа 3 Varivax, выращиваемая на линии MRC–5, или человеческих клетках абортированных зародышей, была контаминирована человеческим эндогенными ретровирусом К. Ротавирусная вакцина Rotarix, выращиваемая на линии E6, или клетках зеленых африканских мартышек, была контаминирована свиным цирковирусом типов 1 и 2. Ротавирусная вакцина Rotateq, выращиваемая на клетках Vero (от африканских обезьян), была контаминирована эндогенным ретровирусом павианов. Коревая и паротитная вакцины в составе MMR II, выращиваемые на клеточных культурах из соединительной ткани куриных эмбрионов, были заражены птичьим эндогенным ретровирусом и человеческим эндогенным ретровирусом К, а краснушная вакцина, выращиваемая на линии WI-38, или человеческих диплоидных клетках соединительной ткани легких,  контаминирована человеческим эндогенным ретровирусом К. Вакцина от краснухи Merivax, выращиваемая на той же линии WI-38, контаминирована человеческим эндогенным ретровирусом К.

Сходным образом контаминированы и ветеринарные вакцины. Геномы всех видов животных колонизированы эндогенными ретровирусами (ERV). Несмотря на то, что большинство эндогенных ретровирусов имеют накопленные дефекты, которые делают их неспособными к размножению, у различных видов млекопитающих были найдены и вполне способные к размножению и инфицированию ретровирусы. Кошачий вирулентный эндогенный ретровирус RD–114 был изолирован из множества живых аттенуированных вакцин для домашних животных. RD–114 был изолирован в двух независимых лабораториях с использованием разные методов, из доступных в Британии и Японии коммерческих вакцин как для кошек, так и собак. Исследования показали, что методики, применяемые в настоящее время для проверки ветеринарных вакцин на наличие эндогенных ретровирусов, являются неадекватными и требуют переоценки8. Тестирование ветеринарных вакцин на вирусную контаминацию в Венгрии обнаружило, что вирусы TTV, очень маленькие кольцевидно скрученные ДНК-вирусы, присутствуют во множестве вакцин, включая птичьи. Присутствие любых посторонних агентов может оказывать значительное негативное влияние на безопасность вакцин9.

Портреты преступников: вирусы-контаминанты и ДНК

Птичий лейкоз (раковый вирус миелоидного лейкоза)

Вирус птичьего лейкоза (ALV–J) является, вероятно, рекомбинантом экзогенного вируса птичьего лейкоза ALV и оболочки гена, предположительно происходящего из эндогенного (подгруппа Е) вируса птичьего лейкоза ALV. ALV–J может инфицировать клеточные культуры различных видов птиц, но не клетки млекопитающих. На сегодняшний день не обнаружено мясных пород кур, которые бы имели генетическую резистентность к этому вирусу. Коммерческие мясные леггорны резистентны к развитию опухолей, но они могут быть восприимчивы к вирусу ALV–J. Большинство онкообразований, ассоциированных с ALV–J, являются миелобластомами и миелоцитомами10. Хотя птичий онковирус не заражает клетки млекопитающих, длительное его воздействие на молодых индивидов может вызвать мутации, которые сделают ALV-J вирулентным для людей, а вирулентные рекомбинанты всегда могут создаваться человеческими эндогенными вирусами.

Птичий эндогенный ретровирус

Птичий эндогенный ретровирус (AER) — представитель крайне разносортной группы ретровирусов, состоящей из многочисленных включений в геном кур. Существует три семейства таких эндогенных ретровирусов, связанных с птичьими вирусами саркомы или лейкоза, вирусами мышиной лейкемии, и человеческими эндогенными ретровирусами соответственно. Большинство из AER пребывает в латентной форме в куриных хромосомах, но некоторые формы активны и способны на создание РНК–транскриптов11. Активные транскрипты могут реплицироваться посредством обратной транскрипции и рекомбинации с родственными вирусами.

Человеческий эндогенный ретровирус К

Человеческие эндогенные ретровирусы (HERVs) подозревают в том, что они вызывают некоторые аутоиммунные заболевания, в частности рассеянный склероз; член этого семейства, эндогенный ретровирус W, был идентифицирован как "ретровирус, ассоциированный с рассеянным склерозом" (MSRV). Человеческие эндогенные ретровирусы включены в около 8% человеческих геномов, с 98000 элементов и фрагментов11; все обнаружения являются дефективными, содержащими беспорядочные мутации или крупные делеции, и не могут продуцировать инфекционные вирусные частицы. Большинство это остатки вирусов, интегрировавшихся много миллионов лет назад. Однако одно семейство, HERV–K (составляющее менее 1% всех эндогенных человеческих ретровирусов), продолжает оставаться активным со времен разделения homo sapiens и шимпанзе, и является одним из наиболее изучаемых. Существуют данные, что тип К был активен последние несколько сот тысяч лет, поскольку у некоторых индивидов обнаруживается больше копий этого вируса. Отсутствие элементов с полным биологическим кодом в последовательностях опубликованного генома человека наводит на мысль о том, что в настоящее время это семейство неактивно6. Как контаминант вакцин, HERV-K не может считаться безвредным, так как способен рекомбинировать с родственными вирусами или другими вирусными последовательностями в человеческих хромосомах.

Эндогенный ретровирус павианов

Эндогенные ретровирусы павианов (BERV) являются инактивированными ретровирусными последовательностями. Они были найдены также и у африканских зеленых мартышек12. Циркуляция в крови человеческой популяции этих ретровирусов предположительно способна вызывать мутации и рекомбинации в вирусы, которые смогут очень быстро распространиться вследствие их новизны для иммунной системы человека.

Кошачьи инфекционные эндогенные ретровирусы (ERV RD–114)

Инфекционные эндогенные ретровирусы, которые были обнаружены в живых аттенуированных вакцинах для кошек и собак. Они связаны с другими онкогенными вирусами, такими как вирус кошачьей лейкемии и вирус 83 лейкемии мышей12.

Свиные цирковирусы типов 1 и 2

Свиные цирковирусы являются маленькими скрученными ДНК-вирусами. Тип 1 не вызывает заболеваний у свиней, тогда как тип 3 вызывает серьезную атрофию у маленьких поросят. Часто обнаруживается, что эти вирусы инфицируют клеточные линии млекопитающих. Цирковирусы типов 1 и 2 инфицируют много типов человеческих клеток. Тип 1 размножается без явных повреждений клеток, а тип 2 вызывает такие повреждения13. Тип 2 вызывает перегруппировку цитоскелета дендритических клеток, ведя к иммуносупрессии14. Свиные цирковирусы внедряются в клеточные ядра и в них воспроизводятся. Репликация происходит по типу катящегося кольца, когда одиночно скрученные вирусные хромосомы размножаются на двойной скрученной матрице репликации. Вирус так мал, что располагает местом только для нескольких генов, включая два гена для запуска репликации ДНК, а также два гена для последовательности аминокислот и оболочечного вирусного белка, и несколько генов, отвечающих за вирулентность15. Ядро клетки-хозяина обеспечивает необходимые для репликации ДНК энзимы16.

Вирусы TTV

Вирусы TTV — одиночно скрученные ДНК-вирусы, инфицирующие позвоночных. Две генетически отличные друг от друга группы вирусов (TTV1 и TTV2) широко распространены и инфицируют свиней по всему миру. В настоящее время свиные TTV считаются непатогенными, хотя TTV2 связывают с синдромом мультисистемного послеотъемного истощения свиней. Свиные TTV реплицируются аналогично цирковирусами, но размерами они намного меньше последних17. TTV часто считают непатогенными, и они очень распространены у млекопитающих, включая людей. Человеческая популяция широко инфицирована TTV, и было обнаружено скопление вирусов в центральной нервной системе больных деменцией18. У детей с рецидивирующей пневмонией было обнаружено отсутствие подвижности ресничек, связанное с высоким уровнем инфицированности ресничных клеток вирусами TTV19.

В заключение

Человеческие и ветеринарные вакцины контаминированы широким спектром вирусов, которые считаются безвредными или менее опасными, нежели аттенуированные живые вирусы в вакцинах. Эти контаминанты никогда не исследовались так, как должны были исследоваться в коммерческих вакцинах перед началом промышленного производства последних. Контаминирующий вирусный мусор считается безопасным, потому что он не вызывает серологические изменения (выработку антител), даже несмотря на то, что он часто вырабатывает протеины, токсичные для отдельных тканей. Контаминированные вакцины в некоторых случаях обладают активной цитотоксичностью, потенциально способны создавать благодаря мутациям и рекомбинациям новые ретровирусы, опасные для человеческой жизни. Среди вирусного мусора маленькие одиночно скрученные ДНК–вирусы заслуживают специального внимания, так как они широко распространены в человеческой популяции и среди животных. Такое широкое распространение вирусов TTV и цирковирусов может привести к катастрофе. Первым шагом в отношении вирусного мусора, контаминирующего вакцины, должно быть получение информированного согласия от прививаемых зараженными вакцинами. Вторым шагом должен быть мониторинг потенциальных опасностей мутаций и рекомбинаций, как было подчеркнуто в настоящей статье.

ПРИМЕЧАНИЯ

1 Victoria JG, Wang C, Jones MS, Jaing C, McLoughlin K, Gardner S, Delwart EL.Viral nucleic acids in live-attenuated vaccines: detection of minority variants and an adventitious virus. J Virol 2010, 84(12), 6033-40
2 Kuehn BM. FDA: Benefits of rotavirus vaccination outweigh potential contamination risk. JAMA 2010, 304(1), 30-1.
3 Martini F, Corallini A, Balatti V, Sabbioni S, Pancaldi C, Tognon M. Simian virus 40 in humans. Infect Agent Cancer 2007, 2, 13.
4 Lowe DB, Shearer MH, Jumper CA, Kennedy RC. SV40 association with human malignancies and mechanisms of tumor immunity by large tumor antigen. Cell Mol Life Sci 2007, 64(7-8), 803-14.
5 Meneses A, Lopez-Terrada D, Zanwar P, Killen DE, Monterroso V, Butel JS, Vilchez RA. Lymphoproliferative disorders in Costa Rica and simian virus 40. Haematologica 2005, 90(12), 1635-42.
6 Wikipedia Human endogenous retroviruses (HERVs) are suspected of involvement in some autoimmune diseases, in particular with multiple sclerosis. 2010 http://en.wikipedia.org/wiki/Endogenous retrovirus
7 Tenpenny S. Flu vaccines and risk of cancer Science in Society 44, 25-26, 2009.
8 Miyazawa T, Yoshikawa R, Golder M, Okada M, Stewart H, Palmarini M.Isolation of an infectious endogenous retrovirus in a proportion of live attenuated vaccines for pets. J Virol 2010, 84(7), 3690-4.
9 Kulcsar G, Farsang A, Soos T.Testing for viral contaminants of veterinary vaccines in Hungary. Biologicals 2010, 38(3), 346-9.
10 Zavala G. An overview of myeloid leukosisin meat-type chickens Technical News Special Technical Bulletin Jan. 1998 http://birdflubook.com/resources/zavala1.pdf
11 Boristenko L. Avian endogenous retroviruses Folio Biologica (Praha) 2003, 49, 177-82.
12 Mang R, Goudsmit J, van der Kuyl AC Novel endogenous type C retrovirus in baboons: complete sequence, providing evidence for baboon endogenous virus gag-pol ancestry. J Virol 1999, 73(8), 7021-6.
13 Hattermann K, Roedner C, Schmitt C, Finsterbusch T, Steinfeldt T, Mankertz A. Infection studies on human cell lines with porcine circovirus type 1 and porcine circovirus type 2 Xenotransplantation 2004, 11(3), 284-94.
14 Balmelli C, Steiner E, Moulin H, Peduto N, Herrmann B, Summerfield A, McCullough K Porcine circovirus type 2 DNA influences cytoskeleton rearrangements in plasmacytoid and monocyte-derived dendritic cells. Immunology 2010 Sep 14. doi: 10.1111/j.1365- 2567.2010.03339.x. [Epub ahead of print].
15 Faurez F, Dory D, Grasland B, Jestin A. Replication of porcine circoviruses. Virol J2009, 6, 60. Review.
16 Gassmann M, Focher F, Buhk HJ, Ferrari E, Spadari S, Hubscher U. Replication of single-stranded porcine circovirus DNA by DNA polymerases alpha and delta. Biochim Biophys Acta 1988, 951(2-3), 280-9.
17 Kekarainen T, Martinez-Guino L, Segales J. Swine torque teno virus detection in pig commercial vaccines, enzymes for laboratory use and human drugs containing components of porcine origin. J Gen Virol 2009, 90(3), 648-53.
18 Maggi F, Bendinelli M. Human anelloviruses and the central nervous system. Rev Med Virol 2010, 20(6), 392-407.
19 Pifferi M, Maggi F, Di Cristofano C, Cangiotti AM, Nelli LC, Bevilacqua G, Macchia P, Bendinelli M, Boner AL. Torquetenovirus infection and ciliary dysmotility in children with recurrent pneumonia. Pediatr Infect Dis J 2008, 27(5), 413-8.

Другие материалы о контаминации (загрязнении) вакцин